Russian English Ukrainian

WebMedFamily.org

Электронный научно-популярный журнал про семейную медицину

 

Захист нирок від гентаміцину.
Введення. Антибіотик групи аміноглікозидів гентаміцин широко використовується при лікуванні інфекцій, обумовлених грамнегативними мікроорганізмами. Тим не менш, його клінічне застосування обмежене у кожного п'ятого пацієнта здатністю індукувати гостре пошкодження нирок, внаслідок стимуляції апоптозу в мезангіальних клітинах і проксимальних канальцях. Як відомо, в цьому процесі важливе значення відіграють мітохондріальні шляху, а медіаторами виступають активні форми кисню (АФК).

Важливий регуляторний фактор захисту від гіпоксії гипокси-індукований фактор (HIF) - фактор транскрипції складається з чутливих до кисню субодиниць ? і ?. В умовах нормоксіі субодиниці ? під дією пролол-гідроксилази швидко проходять кисень-залежне гідроксилювання пролінових залишку (ПГЛ). При гіпоксії субодиниці ? не наражати пролив-гидроксилированию і зв'язуються з субодиницями ?, що дозволяє HIF транслоцироваться в ядро ??і активувати транскрипцію генів, що беруть участь в таких процесах як еритропоез, ангіогенез, клітинний метаболізм, клітинна проліферація і апоптоз. Інгібітори ПГЛ стабілізують і активують HIF, тим самим підвищуючи ефекти цього чинника. На сьогоднішній день з інгібіторів ПГЛ відомі діметілоксалілгліцін (DMOG) і кобальт.

Вважається, що ап-регуляція HIF відіграє важливу протекторну роль в різних моделях захворювань нирок, у тому числі при ішемічному або нефротоксичний гострому пошкодженні, а також при хронічній хворобі нирок. Нещодавно було продемонстровано антиоксидантну дію HIF при нирковій ішемії-реперфузії і діабетичної нефропатії. Крім того, активація HIF приводить до придушення апоптозу клітин ниркових канальців при цисплатин-індукованої нефротоксичности.

Метою даного дослідження була оцінка протекторних властивостей HIF при гентаміцин-індукованому ураженні клітин ниркових канальців in vitro і in vivo.

Матеріали та методи. Дане дослідження проводилося на культурі клітин епітелію проксимальних канальців нирок людини і на тваринних моделях.

У першому досвіді клітини були розділені на чотири групи: 1) контрольні клітини; 2) оброблені гентамицином клітини; 3) попередньо оброблені кобальтом та гентамицином клітини; 4) попередньо оброблені DMOG і гентаміцином клітини. Попередні дослідження показали, що не спостерігалося жодних несприятливих ефектів при обробці клітин кобальтом або DMOG в дозах, що використовуються в цьому дослідженні. Гентаміцин-опосередкований апоптоз в клітинах виявлявся за допомогою ферментативної маркування розривів ДНК TUNEL фарбуванням.

Другий експеримент проводився на тваринної моделі. Сімнадцять самців щурів Sprague-Dawley рандомізовані на три групи: контроль, гентаміцин + фізіологічний розчин 0,9% (GM + VEH) і гентаміцин + кобальт (GM + Co). Раніше підтверджено, що застосовувана доза кобальту не робить несприятливого впливу на організм щура.

Для стимулювання гострого ураження ниркової тканини в групах GM + VEH і GM + Co вводилося внутрішньом'язово 80мг / кг гентаміцину одноразово щодня протягом 7 діб. Контрольній групі вводився 0,9% фізіологічний розчин.

Після 7 днів експерименту були зібрані зразки крові для оцінки рівня креатиніну і сечовини, і для морфологічного і імуногістохімічного аналізів під наркозом кетаміном і ксілазіном були вилучені нирки. Крім цього протягом останньої доби збиралася сеча для оцінки обсягу, концентрації білка, рівня сечовини і креатиніну.

Результати та висновки. Кобальт і DMOG є інгібіторами ПГЛ і тому здатні активувати HIF.

У досвіді in vitro рівень HIF-1? істотно не відрізнявся в контролі і оброблених гентамицином клітинах. При цьому концентрація HIF-1? була значно вищою в клітинах, попередньо оброблених кобальтом або DMOG. При TUNEL фарбуванні виявлено, що число піддалися апоптозу клітин після обробки гентамицином помітно збільшилися. Попередня обробка кобальтом або DMOG значно скоротила гентаміцин-індукований апоптоз.

У досвіді in vivo ап-регуляція HIF-1? введенням кобальту була продемонстрована методом вестерн-блот гомогенату клітинних ядер нирок. Також як і в досліді з культурою клітин, рівень HIF-1? істотно не відрізнявся в групі контролю і GM + VEH. При цьому концентрація HIF-1? була значно вищою у щурів групи GM + Co. У групі GM + Co був значно збільшений рівень мРНК ендотеліального фактора росту судин - VEGF (3,16 ± 2,49 рази в порівнянні з контролем), що говорить про прояв ефекту HIF.

Для аналізу гентаміцин-індукованого апоптозу в нирках щурів був використаний метод TUNEL фарбування, що виявляє розриви ниток ДНК. Піддані апоптозу клітини були виявлені в групах GM + VEH і GM + Co, однак у отримували кобальт щурів кількість цих клітин було в три рази менше, що говорить про високу ефективність препарату.

Нефропротекторние властивості кобальту підтверджувалися і такими лабораторними показниками як зменшення протеїнурії та збільшення кліренсу креатиніну.

Дане дослідження доводить високу ефективність інгібіторів пролол-гідроксилази в якості нефропротекторов при гентаміцин-опосередкованому ураженні нирок, однак, необхідно проведення клінічних досліджень.

Джерело: Jeong-myung Ahn, Sun Jin You, Yun-Mi Lee, Se-Won Oh, Shin-young Ahn, Sejoong Kim, Ho Jun Chin, Dong-Wan Chae, Ki Young Na. Hypoxia-Inducible Factor Activation Protects the Kidney from Gentamicin-Induced Acute Injury. PLoS ONE. November 8, 2012

Календар

Сентябрь 2017
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
1
2
3
4
5
7
10:00
м. Київ, вул. Богдана Хмельницького, 37, Національний музей медицини.
Дата :   7 Сентябрь 2017 г.
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

Facebook